Publicado en Revista de Fruticultura nº72

Los estudios previos sobre la etiología de esta enfermedad, desarrollados en California, indican que los principales agentes causales son hongos fitopatógenos que se engloban dentro de la familia Botryosphaeriaceae y del género Diaporthe (sinónimo Phomopsis) (Michailides y Hasey, 2010; Chen et al., 2014; Li et al., 2015). Es bien sabido que las especies de estos hongos están ampliamente distribuidas a nivel mundial, afectando a gran diversidad de cultivos leñosos causando seca de ramas, chancros y decaimiento, así como podredumbre de frutos en algunos casos (Phillips et al., 2008; Guarnaccia et al., 2018). En California se han descrito las siguientes 12 especies asociadas con la seca de ramas y marchitez de brotes de nogal: i) Botryosphaeriaceae: Botryosphaeria dothidea, Diplodia mutila, D. seriata, Dothiorella iberica, Lasiodiplodia citricola, Neofusicoccum mediterraneum, N. nonquaesitum, N. parvum, N. vitifusiforme, y Neoscytalidium dimidiatum; ii) Diaporthe: Diaporthe neotheicola (=Dia. foeniculacea, Dia. foeniculina), y Dia. rhusicola (Michailides y Hasey, 2010; Chen et al., 2014). En otros países productores de nogal, como China o Chile, se han descrito las especies B. dothidea y L. pseudotheobromae (Li et al., 2015), y D. mutila, respectivamente (Diaz et al., 2018), asociadas con esta enfermedad.

Recientemente, también se han descrito hongos del género Cytospora asociados con la seca y marchitez de ramas del nogal. Concretamente, en China se han descrito las especies Cytospora atrocirrhata, C. chrysosperma, C. gigalocus, C. nivea y C. sacculus afectando a este cultivo (Fan et al., 2015; Zhao et al., 2018).

En España, muchas especies fúngicas de la familia Botryosphaeriaceae han sido identificadas causando síntomas de seca de ramas y decaimiento en cultivos leñosos como el almendro (Gramaje et al., 2012; Olmo et al., 2017a), la vid (Agustí–Brisach et al., 2019a), y el olivo (Agustí–Brisach et al., 2017b; Moral et al., 2017); así como en especies forestales como Quercus spp. (Sánchez et al., 2003). En el caso de Diaporthe, la especie más conocida en España es Phomopsis amygdali, principal agente causal de la seca de ramas y chancros del almendro (Gramaje et al., 2012; Olmo et al., 2017a).

Especies fúngicas asociadas a la seca de ramas y marchitez de brotes del nogal en el sur de España

Entre primavera de 2017 y verano de 2018, el Grupo Patología Agroforestal AGR–216 de la Universidad de Córdoba (UCO), en colaboración con el Equipo de Fruticultura del IFAPA–Alameda del Obispo (Córdoba), hemos prospectado un total de 10 plantaciones comerciales de nogal distribuidas en las provincias de Almería, Badajoz, Granada, Málaga y Sevilla. Los campos contaban con las principales variedades comerciales de nogal cultivadas en estas zonas (‘Chandler’, ‘Hartley’, ‘Serr’, ‘Tulare’ y ‘Vina’) y tenían edades comprendidas entre 12 y 35 años. Todos ellos mostraban síntomas de la enfermedad, aunque con incidencia variable.

En cada campo se tomaron muestras de madera de al menos tres árboles afectados. En laboratorio, las muestras de madera se procesaron siguiendo los protocolos establecidos para el aislamiento de hongos en medio de cultivo. Posteriormente, se identificaron tanto en base a caracteres morfológicos como moleculares, y se procedió a evaluar su patogenicidad, tanto en condiciones controladas de laboratorio como en campo. El aislamiento de los hongos causantes de estas enfermedades fue frecuente en la mayoría de los campos prospectados. En general, los hongos de la familia Botryosphaeriaceae se aislaron con mayor consistencia (53%), seguidos de Diaporthe (38%). Cytospora sólo se aisló de un campo y con muy bajo porcentaje de aislamiento (9%). Cabe destacar que, en un 70% de los campos, se observó co–infección de especies de Botryosphaeriaceae y Diaporthe.

Los caracteres morfológicos de estos hongos mostraron en general colonias con micelio algodonoso, de crecimiento rápido en medio de cultivo patata dextrosa agar (PDA) y de colores que variaron de gris claro a gris oscuro o gris oliváceo, en el caso de Botryosphaeriacecae; y de blanco a beige, en el caso de Diaporthe (Figura 2). Los aislados de Cytospora mostraron colonias de crecimiento más lento, con micelio no algodonoso y tonalidades gris–verdoso. En general, nuestros aislados mostraron un amplio rango de temperatura óptima de crecimiento, que varió de 19,5 a 27,7°C para Cystospora spp. y B. dothidea, respectivamente.

Las técnicas de biología molecular permitieron identificar las siguientes especies fúngicas: i) Botryosphaeriaceae: B. dothidea, D. seriata, Dot. sarmentorum, Dothiorella sp., N. mediterraneum y N. parvum; ii) Diaporthe: Dia. neotheicola, Diaporthe sp., Dia. rhusicola y Ph. amygdali; iii) Cytospora sp. Como se puede observar, algunos aislados fúngicos no pudieron ser identificados a nivel de especie (Cytospora sp., Diaporthe sp. y Dothiorella sp.) debido a que actualmente no existen secuencias de ADN similares en la base de datos internacional (GenBank) que permitan su correcta identificación, por lo que, probablemente, podría tratarse de especies nuevas que habría que describir en un futuro.

Los ensayos de patogenicidad mostraron que, tanto en condiciones controladas de laboratorio como en campo, así como en todos los tejidos inoculados (ramas y frutos inmaduros), los hongos de la familia Botryosphaeriaceae fueron los más virulentos en todos los casos, seguidos de Diaporthe y finalmente Cytospora (Figura 3). Neofusicoccum parvum fue la especie más virulenta en todos los casos, seguida de las especies B. dothidea o N. mediterraneum (Figuras 3–5). En campo, estas especies provocaron la seca total de las ramas inoculadas, observándose una alta severidad de la enfermedad en las ramas inoculadas con N. parvum (67% de ramas muertas) (Figura 4B).

En la Figura 6 se muestra el ciclo biológico de la enfermedad adaptado a las condiciones medioambientales y agronómicas del sur de España.

A pesar de la patogenicidad y del alto grado de virulencia de algunas de las especies descritas, todos estos hongos (Botryosphaeriaceae, Cytospora y Diaporthe) se consideran saprofitos o endófitos, siendo capaces de sobrevivir en los tejidos muertos o poco activos de las plantas, como la corteza y madera de los árboles o restos de poda que quedan en el campo. En este sentido, muchos de estos hongos tienen un comportamiento oportunista y se consideran patógenos facultativos que atacan en momentos de debilidad del huésped, generalmente asociado a condiciones de estrés, ya sea ambiental o propio del manejo agronómico del cultivo. Además, estos hongos necesitan heridas para poder penetrar, y pueden ser dispersados a través de las herramientas de poda (Phillips et al., 2008; Guarnaccia et al., 2018; Agustí–Brisach et al. 2017a,b, 2019).

Estos hongos desarrollan cuerpos fructíferos (picnidios) sobre los tejidos muertos y en su interior producen los conidios. Cuando las temperaturas son óptimas (23–28ºC), los conidios son liberados de los picnidios y se dispersan por la lluvia, el viento o incluso a través de insectos vectores, siendo el inóculo primario del patógeno. Los conidios llegan a la superficie dañada (p.e. herida de poda, punto de abscisión de fruto, etc.), germinan y penetran en el interior de la planta a través de los tejidos heridos. Tras la infección, la fase de latencia de estos hongos puede ser muy prolongada, comportándose como endófitos en muchos casos. El cambio de la fase endofítica a la patogénica parece determinado por diversos factores ambientales, aunque son necesarios sucesivos estudios de investigación para demostrar si las diferentes situaciones de estrés, tanto ambiéntales como del propio manejo del cultivo, pueden tener un efecto significativo en la infección (Agustí–Brisach et al., 2017b).

Finalmente, es importante destacar que las co–infecciones entre especies de Botryosphaeriaceae y Diaporthe pueden tener un efecto retardante o antagonista en la infección y desarrollo de la enfermedad. En este sentido, estudios realizados recientemente por Agustí–Brisach et al. (2019) en California demuestran que cuando la infección de Dia. rhusicola se produce cuatro días antes que la infección de N. mediterraneum, se observa un retraso significativo del desarrollo de la lesión en comparación con otros tratamientos donde la co–infección de ambas especies se produce en el mismo momento, o bien, cuando la infección de N. mediterraneum ocurre cuatro días antes que Dia. rhusicola.

Actualmente, no existen estudios específicos de control de esta enfermedad en nogal en España, por lo que su control se fundamenta en la información general disponible sobre las enfermedades de la madera en otros cultivos leñosos como la vid, el olivo o el almendro, donde se dispone de más información. No obstante, en líneas generales, el control de la enfermedad se basará fundamentalmente en las buenas prácticas culturales y los tratamientos fungicidas preventivos, con especial énfasis en los momentos en los que se produzcan heridas en el árbol.

Prácticas culturales

Las heridas producidas en el árbol durante las labores de recolección y poda serán la principal vía de entrada de los patógenos, por lo que el agricultor deberá ser especialmente cuidadoso para causar el menor daño posible en el árbol (heridas en ramas y brotes) previniendo así la infección de estos hongos. Por otro lado, la desinfestación de las herramientas de poda, con hipoclorito sódico al 10% o alcohol al 70%, tras finalizar la poda de cada árbol será esencial para evitar la transmisión de los patógenos entre árboles afectados y sanos. Finalmente, se recomienda encarecidamente la eliminación de los restos de poda del campo para reducir la fuente de inóculo principal del patógeno y prevenir infecciones futuras.

Control químico

Inmediatamente después de la generación de heridas (poda, recolección, etc.) o de momentos de caída abundante de hojas o frutos, deberán realizarse tratamientos fungicidas preventivos destinados a proteger los tejidos vegetales heridos frente a una posible infección. Actualmente, no podemos indicar un tratamiento específico que permita proteger las heridas de forma óptima frente a una posible infección de los hongos causantes de chancros y seca de ramas. No obstante, estudios previos abordados en otros cultivos leñosos, como almendro u olivo, indican que las aplicaciones de compuestos cúpricos, junto con triazoles o estrobilurinas, podrían tener un efecto significativo en la protección de las heridas (Agustí–Brisach et al., 2017b).

Recientemente, Olmo et al. (2107b) han evaluado in vitro la eficacia de varios fungicidas frente a cuatro especies de Botryosphaeriaceae (D. seriata, N. luteum, N. mediterraneum y N. parvum) asociadas con los chancros de ramas del almendro. Estos estudios mostraron que las materias activas ciproconazol, tebuconazol, piraclostrobin y metil–tiofanato tienen un efecto muy marcado en la inhibición del crecimiento micelial. Además, estos mismos autores evaluaron el efecto de varios fungicidas (boscalida, mancozeb, metil–tiofanato, piraclostrobin y tebuconazol) en la protección de heridas de poda en plantones de almendro inoculados con las especies de Botrysophaeriaceae indicadas anteriormente. Los resultados mostraron que el metil–tiofanato fue el fungicida más efectivo en la protección de las heridas de poda frente a la infección de Botryosphaeriaceae (Olmo et al., 2107b).

Finalmente, estudios sobre el control de la seca de ramas y marchitez de brotes del nogal llevados a cabo en California indican que las aplicaciones de tratamientos fungicidas mediante el uso de materias activas o mezclas como Cobre + mancozeb, fluopiram + piraclostrobin, o fluopiram + tebuconazol, desde abril a agosto, con especial atención en las aplicaciones estivales, pueden ser altamente efectivos para el control de la enfermedad (Adaskaveg et al., 2017).

Sin embargo, es necesario seguir evaluando fungicidas, tanto en condiciones controladas como en nuestras condiciones de campo, para identificar materias activas eficaces frente a estos patógenos y para determinar los momentos óptimos de los tratamientos para evitar la infección y desarrollo de la enfermedad.

Estos trabajos han sido financiados por el Proyecto Transforma de Fruticultura Mediterránea del IFAPA (Consejería de Agricultura, Junta de Andalucía) con la colaboración de las empresas Almendras Francisco Morales, Borges–Bain y Todolivo, y las OPFHs Crisolar y Mañán. C. Agustí–Brisach disfruta de una Ayuda Juan de la Cierva–Incorporación financiada por el MICINN.

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